Определение микробной загрязненности воздуха

В гигиенической практике для оценки бактериального загрязнения воздуха определяют общее количество бактерий, содержащихся в 1 м³воздуха (микробное число), а также количество санитарно-показательных микроорганизмов и вид микробов.

Для определения общего числа бактерий в воздухе применяют метод осаждения, посев микробов на чашки Петри при помощи прибора Кротова, улавливание бактерий с помощью фильтров и жидкостей.

Метод осаждениязаключается в следующем: в чашки Петри в стерильных условиях разливают по 15 мл агара. Затем чашки на 5 мин выставляют в исследуемом месте, закрывают их и помещают в термостат при температуре 37^оС на 24 или 48 ч, после чего подсчитывают количество выросших колоний на всей площади чашки Петри.

Пример расчета. Количество микроорганизмов в 1 м³ определяют, исходя из того, что на площадь 100 см чашки Петри оседает за 5 мин примерно столько микробов, сколько их содержится в 10 л воздуха.

Предположим, что на чашку Петри площадью 200 см² за 5 мин осело 80 микроорганизмов из воздуха объемом 10 л. Следовательно, на площади 200 см² их оседает из 10 л воздуха: (х = 200 · 10) : 100 = 20. В данном случае в 1 м³ исследуемого воздуха будет содержаться:

х = (1000 · 80):200 = 4000 микроорганизмов.

Метод просасывания через стерильные жидкости. Для определения количества микроорганизмов в определенном объеме воздуха готовят физиологический раствор и наполняют им поглотители (пипетки). Поглотители с раствором стерилизуют а автоклаве завернутыми в бумагу, в которой и доставляют их к месту исследования. Присоединяют поглотитель к аспиратору и пропускают через поглотитель 25 – 50 л воздуха. Градуированной стерильной пипеткой производят посев 1 мл физраствора с задержанными на нем микроорганизмами. Посевы инкубируют в термостате в течение 24 – 48 часов при температуре 37,5^оС.

Подсчитывают количество выросших колоний в пересчете на общий объем жидкости, взятой в поглотитель, и определяют содержание их в 1 м³исследуемого воздуха.

Пример расчета: Пропущено 50 л воздуха через 25 л физиологического раствора. Посеяно на чашку 1 мл. При подсчете было найдено 20 колоний в чашке. Так как из 25 мл на чашку был посеян только 1 мл, а объем пропущенного воздуха составил 50 л (1/20 м³), то при пересчете на 1 м³ получим: (30 · 25 · 40) / 1 = 30000 микроорганизмов в 1 м³ воздуха.

Определение микробной загрязненности воздуха аппаратом Кротова. Более совершенным способом определения микробной загрязненности воздуха является посев микроорганизмов из воздуха на чашки Петри с твердой питательной средой с применением прибора Кротова.

Прибор Кротовасостоит из корпуса, основания и крышки. В крышку вложен прозрачный диск из плексигласа с клиновидной щелью для засасывания исследуемого воздуха. Для учета количества воздуха, прошедшего через прибор, на корпусе укреплен ротометр с вентилем. На основании прибора установлен электромотор, на оси которого укреплен центробежный вентилятор. Внутри вентилятора расположена восьмилопастная крыльчатка, которая вращается со скоростью около 60 об/мин и засасывает воздух через клиновидную щель, расположенную по радиусу чашки Петри. Чашку Петри с твердой питательной средой устанавливают на вращающемся диске, расположенном в верхней части корпуса. Поступающий через клиновидную щель воздух ударяется о поверхность питательной среды чашки Петри, к ней прилипают микроорганизмы.

Ход определения:После ознакомления с устройством прибора, его устанавливают на ровной горизонтальной поверхности в точке исследования. Прибор включают в сеть, прогревают в течение 5 – 10 минут, устанавливают регулятором скорость просасывания воздуха в пределах 25 л/мин. Открывают крышку и быстро ставят на столик прибора открытую чашку Петри с агаром или другой питательной средой. После этого закрывают крышку и осторожно опускают держатель столика. Всасывающийся внутрь прибора воздух с большой скоростью проходит через щель и ударяется о поверхность питательной среды, оставляя на ней взвешенные частицы, в том числе и микроорганизмы. Так как чашка вращается, то посев микробов происходит равномерно по всей ее поверхности. Через прибор пропускают 50 л воздуха в течение 2-х минут (количество пропущенного воздуха зависит от предполагаемой степени загрязненности).

Вынув из прибора, чашку Петри после просасывания воздуха, помещают в термостат при температуре 37,5 ^оС на 24 – 48 часов. По количеству выросших в чашке колоний определяют количество бактерий в 1 м³воздуха.

Подсчет колоний производится с помощью сетки с делениями по 1 см². Подсчитывают число колоний в 10 квадратах по диагонали, находят среднее арифметическое для 1 см². Затем находят площадь чашки в см², для чего измеряют ее диаметр и ведут расчет по формуле:π · r².

Пример расчета:

Диаметр чашки 10 см. Тогда r = 5 см. Площадь чашки (π · r²) = 3,14 · 25 = 78,5 см². Если на 10 квадратах сосчитано 120 колоний, то есть 12 на 1 см², то на поверхности чашки будет 12 · 78,5 = 942 колонии.

Через прибор пропущено 50 л воздуха в течение 2 минут, число выросших бактерий 942. Тогда количество бактерий в 1 м³ воздуха будет равно:

х = (942 · 1000) : 50 = 18840