Определение титра кишечной палочки (e. Coli)

Кишечная палочка постоянно обитает в кишечнике человека и животных. Ее наличие в воде, особенно если вода содержит одновременно аммиак, азотистую и азотную кислоты, хлориды, сульфаты или имеет повышенную окисляемость, может быть показателем того, что вместе с кишечной палочкой могут попасть в воду и другие, патогенные микроорганизмы.

Результаты количественного определения в воде кишечной палочки выражают выражают в виде коли-титра (титра кишечной палочки) и коли-индекса.

Коли-титром называется наименьший объем исследуемой воды, в котором была обнаружена кишечная палочка. Коли-индекс показывает число кишечных палочек в 1 л воды.

Оборудование и питательная среда: термостат, среда Булира приготовленная из 1 л слабощелочного мясо-пептонного бульона, 12,5 г маннита, 6 мл 1%-ного раствора краски нейтральрот.

Среду разливают по колбам и пробиркам, помещая в них маленькие пробирочки (газовки) дном верх.

Ход определения: Исследуемую воду взятую из источников водоснабжения в стерильную посуду, быстро доставляют в лабораторию, где ее засевают в колбы и пробирки. Сравнительно чистую воду из водопровода, благоустроенных колодцев, артезианских скважин засевают в пробирки в количестве 1 и 5 мл и в колбы в количестве 10, 25, 100 мл. Воду из открытых водоемов в зависимости от предполагаемого загрязнения засевают в пробирки в количестве 0,01; 0,1; 0,2; 0,5; 1 мл или же 0,001; 0,01; 0,1; 1 мл (путем разведения в стерильной воде). Соотношение засеваемой воды и питательной среды должно быть 2 : 1 Встряхиванием пробирки или колбы воду хорошо смешивают со средой, стараясь заполнить засеянной средой весь объем опущенной пробирочки (газовки). Посевы помещают в термостат при 45 ^оС на 24 часа.

Учет результатов: Под влиянием жизнедеятельности и роста кишечной палочки происходит разложение маннита с образованием газа, который частично улавливается в газовки в виде хорошо различимого пузырька, вследствие чего газовка принимает вертикальное положение и даже несколько всплывает. При росте В. Coli в среде происходит накопление кислот, которые и изменяют окраску среды из красной в желтую.

По изменению цвета среды и образованию газа определяют наименьший объем, воды в котором обнаружена кишечная палочка, считая этот объем коли-титром, чем меньше количество воды, в котором она обнаружена, тем более загрязненной считается вода. Коли-индекс высчитывают по титру кишечной палочки: 1000 / коли-титр.