logo
Методическое руководство к аудиторным занятиям

Тема: Биохимия печени.

ЦЕЛЬ: 1.Обобщить материал по биохимии печени в обмене углеводов, липидов, аминокислот, белков.

2.Изучить обмен гемоглобина.

3.Ознакомиться с методом количественного определения билирубина.

ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ ВОПРОСЫ ДЛЯ ПОДГОТОВКИ К ЗАНЯТИЮ.

  1. Биологическая роль печени в обмене углеводов, липидов, аминокислот, белков.

  2. Важнейшие механизмы обезвреживания веществ в печени: микросомальное окисление, реакции конъюгации / глюкуронидная, сульфатная, аминокислотная/. Примеры обезвреживания ксенобиотиков, продуктов гниения белков. Значение метаболизма лекарственных веществ. Представление о химическом канцерогенезе.

  3. Распад гема. Образование билирубина и билирубинглюкуронида. Пути выведения билирубина и других желчных пигментов. Значение определения желчных пигментов для диагностики болезней печени, желчных путей и крови. Понятие о желтухе новорожденных.

  4. А. Рассмотреть схему реакций окисления веществ в микросомах:

О2 RH

НАДФН+Н+

цитохром Р-450

НАДФ+

Н2О

RОН

Б. Обратить внимание на то, что цитохром Р-450 катализирует реакции гидроксилирования, в которых органический субстрат RН гидроксилируется до RОН за счет одного из атомов кислорода О2, тогда как второй атом кислорода восстанавливается до Н2О, в результате присоединения восстановительных эквивалентов от НАДН или НАДФН. Таким образом гидроксилируются стероиды в процессе образования гормонов надпочечников, ряд лекарственных препаратов и других чужеродных веществ. В результате гидроксилирования уменьшается токсичность и повышается растворимость чужеродных соединений, что способствует выведению их из организма.

  1. Рассмотреть таблицу “Виды желтух”, обратив внимание на биохимические показатели продуктов обмена билирубина в крови, моче и кале.

Таблица “Виды желтух”

Название желтух

Причины возникновения

Биохимические показатели продуктов обмена билирубина

Кровь

Моча

Кал

1. Гемоли-тическая

Разрушение эритроцитов

Увеличение непрямого билирубина

Увеличение уробилина

Увеличение уробилина, стеркобилина

2. Паренхи-матозная (печеночно-клеточная)

Повреждение клеток печени вирусами, токсическими гепатотропными соединениями

Увеличение содержания прямого и непрямого билирубина

Появление прямого билирубина снижение уробилина в моче

Уменьшение выделение стеркобилина

3.Обтура-ционная

(механическая)

Механические нарушения оттока желчи в кишечник

Увеличение содержания прямого били рубина

Увеличение прямого билирубина

Отсутствие желчных пигментов

Лабораторная работа.

Работа № 1. Количественное определение билирубина сыворотки крови по методу Иендрашика.

В сыворотке крови содержится два вида билирубина: нерастворимый (в виде комплекса с белками, обеспечивающими транспорт), по способу определения «непрямой» и растворимый (диглюкуронид), по способу определения «прямой». Вместе обе формы составляют общий билирубин.

Определение содержания билирубина в крови является важным диагностическим тестом. Билирубин обычно содержится в крови в небольших количествах – 8,5 – 20,5 мкмоль/л, причем 75% из них составляет билирубин, связанный с белками (нерастворимый).

При различных поражениях печени и желтухах часто наблюдается гипербилирубинемия.

Метод основан на колориметрическом определении интенсивности окраски продукта взаимодействия билирубина с диазореактивом. Этот продукт окрашен в малиново-красный цвет. Билирубиндиглюкуронид реагирует с диазосмесью непосредственно. Связанный с белками билирубин реагирует с диазосмесью после диссоциации белкового комплекса, которая достигается прибавлением к сыворотке кофеинового реактива. Диазосмесь готовят (в количестве, достаточном для всей учебной группы), смешивая 10 мл 0,5%-ного р-ра сульфаниловой кислоты и 0,3 мл 0,5%-ного р-ра нитрита натрия.

ХОД РАБОТЫ. Готовят две пробирки (контрольную и опытную).

Составляют реакционную смесь по схеме:

Проба

Сыворотка крови, мл

Кофеиновый раствор, мл

Дистилли-рованая вода, мл

Диазо-смесь, мл

Опытная

Контрольная

1

-

3,5

3,5

-

1

0,5

0,5

Содержимое опытной и контрольной проб хорошо перемешивают, ставят на 20 мин в темноту, затем колориметрируют на ФЭКе с зеленым светофильтром ( длина волны 500-560 нм) против контроля.

Если в пробах развивается слабая окраска, то перед колориметрированием в обе пробирки добавляют по 3 капли 30%-ного р-ра NаОН. При этом цвет р-ра переходит в зеленый, а при большей концентрации билирубина в синий, часто наблюдается исчезновение мути. Пробы колориметрируют на ФЭКе с красным светофильтром. Расчет проводят по калибровочному графику.

ЛИТЕРАТУРА ДЛЯ ПОДГОТОВКИ К ЗАНЯТИЮ. Основная:

  1. Берёзов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия: Учебник. – 3-е изд., перераб. и доп. - М.: Медицина, 2002, с. 506-508, 551-566.

  2. Биохимия: Учебник/Под ред. Е.С. Северина. –М.: ГЭОТАР-МЕД, 2003, (Серия XXI век), с. 616-655.

  3. Николаев А.Я. Биологическая химия. М.: Медицинское информационное агентство, 2001, с. 411-426.

  4. Лекционный материал.

Дополнительная:

  1. Бородин Е.А. ‘‘Биохимический диагноз’’, часть 1, Благовещенск, 1991.

  2. Бышевский А.Ш., Терсенов О.А. ‘‘Биохимия для врача’’, Екатеринбург, 1994.

  3. Клиническая биохимия /Под ред. В.А. Ткачука –М.: ГЭОТАР-МЕД, 2002. -360 с. –(Серия XXI век)

  4. Клиническая биохимия /Пер. с англ. –М. –СПб.: «Издательство Бином» - «Невский Диалект» 1999. -368 с., ил.

  5. Марри Р. и соавтор. ‘‘Биохимия человека’’ М.: Мир, 1993, т. 1.