2.5 Вітамін В12

Якісні реакції

Розчин вітаміну В₁₂ має характерний спектр поглинання в ультрафіолеті з максимумами при 278, 361 і 548 нм і коефіцієнтами поглинання в зазначених точках відповідно 115, 207 і 64, причому коефіцієнт поглинання при 361 нм для препаратів звичайної очищення перевищує в 2,8-3,4 раза коефіцієнт поглинання при 548 нм.

Кількісне визначення

І.Спектрофотометричний метод. В розчинах ампулірованних препаратів в кюветі спектрофотометра (в 1 см товщини) визначають коефіцієнт поглинання при 548 нм. Вміст вітаміну В₁₂ в 1 мл випробуваного розчину обчислюють за формулою. Кількість вітаміну В₁₂ в микрограммах де Е - спостережуваний коефіцієнт поглинання; 64 - коефіцієнт поглинання для 1% -ного розчину вітаміну В12, т. Е. При вмісті 1000 мікрограмів в 1 мл; 104 - коефіцієнт перерахунку концентрації вітаміну В₁₂ з 1% в мікрограми на 1 мл.

2. Колориметричний метод. При відсутності спектрофотометра користуються Фотоелектроколориметр із зеленим світлофільтром. Вміст вітаміну В12 у випробуваному зразку визначають шляхом вимірювання коефіцієнта поглинання. По знайденому коефіцієнту, користуючись калібрувальної кривої, встановлюють яка кількість вітаміну В₁₂ йому відповідає. Для складання калібрувальної кривої для колориметра ФЕК беруть розчини чистого вітаміну В₁₂ з вмістом 10, 15, 20, 25 і 30 мкг в 1 мл і визначають коефіцієнти поглинання, користуючись кюветами в 1 см завтовшки.

Відкладаючи по осі абсцис вміст вітаміну В₁₂, а по осі ординат коефіцієнти поглинання, будують калібрувальну криву, по якій і відраховують, якій кількості вітаміну В₁₂ відповідає коефіцієнт поглинання випробуваного зразка.