2.4 Фолієва кислота

Якісні реакції

1. Одержання азобарвника.

2. Спектр поглинання в ультрафіолеті (при рН 11) має максимум при 255, 282 і 365 нм.

Кількісне визначення

При відновленні фолієвої кислоти в солянокислом розчині цинкової пилом в числі інших продуктів отщепляется пара-аміно-бензойна кислота, яку диазотируют нітритом натрію. Отримана сіль діазонію поєднується з N- (1-нафтил) -етілендіамінді-гідрохлоридом у присутності сульфамат амонію NH2SO2 ONH4.

При цьому спостерігається фіолетове забарвлення розчину, інтенсивність якої пропорційна концентрації і вимірюється в фотоколориметрі або в спектрофотометрі.

Потрібні реактиви: 1) розчин желатин (1,5 г желатини і 0,1 г бензойної кислоти розчиняють в 100 мл води), 2) 10% -ний розчин соляної кислоти, 3) 0,1% -ний розчин нітриту натрію, 4 ) 8% -ний розчин сечовини і 5) 0,1% -ний розчин N- (1-нафтил) -этилендиаминдигидрохлорида.

Точно 0,05 г пара-амінобензойної кислоти з температурою плавлення 186-187 ° відважують в стаканчику ємністю 15-20 мл, розчиняють в 96% -ному етиловому спирті, переливають в мірну колбу ємністю 50 мл, стаканчик промивають 3-4 рази спиртом (загальна кількість спирту 25 мл), розчин доводять водою до мітки і перемішують. З цього розчину відбирають 1 мл в колбу ємністю 250 мл, додають 175 мл води, 45 мл 10% -ного розчину соляної кислоти, 2,5 мл розчину желатини, доводять до мітки водою і перемішують. В 1 мл розчину міститься 0,004 мг пара-амінобензойної кислоти.

В чотири колби ємністю 15-20 мл вливають піпеткою 1, 2, 3 і 4 мл приготованого розчину і доводять обсяг розчину в кожній колбі водою до 5 мл і додають по 0,7 мл 10% -ного розчину соляної кислоти, по 1 мл 0, 1% -ного розчину нітриту натрію, добре перемішують і залишають на 5 хвилин. Потім в кожну колбу додають по 1 мл 8% -ного розчину сечовини, перемішують і знову залишають на 5 хвилин. Після цього в кожну колбу додають по 1 мл 0,1% -ного розчину N- (1-нафтил) -этилендиаминдигидрохлорида, по 1,3 мл води, перемішують, залишають на 10 хвилин і потім визначають забарвлення розчину "електрофотоколоріметром з світлофільтром 550 нм. Для отримання стандартної кривої на осі ординат наносять показання гальванометра, а на осі абсцис - кількість міліграмів і зєднують прямою лінією точки перетину перпендикулярів, відновлених з відповідних точок осей графіка.

Визначення загальної кількості (звязаною і вільною) р-амінобензоілглутаміновой кислоти в препаратах.

Точну наважку препарату (0,049-0,050 г) в стаканчику ємністю 15-20 мл змочують декількома краплями води і розчиняють в 0,1 н. розчині їдкого натру. Розчин переливають в мірну колбу ємністю 50 мл, стаканчик промивають кілька разів 0,1 н. розчином їдкого натру, зливаючи промивну рідину в ту ж колбу. Обсяг розчину доводять 0,1 н. розчином їдкого натру до мітки і добре перемішують. З отриманого розчину відбирають 1 мл в мірну колбу ємністю 100 мл, додають 75 мл води, 18 мл 10% -ного розчину соляної кислоти, 1 мл розчину желатини, доводять до мітки водою і перемішують (розчин А).

До 75 мл розчину в конічній колбі ємністю 150 мл додають 0,5 г цинкового пилу і залишають на 15 хвилин при частому перемішуванні. Розчин фільтрують через сухий фільтр в суху колбу, відкидаючи перші 15-20 мл фільтрату. До 2 мл фільтрату в колбі ємністю 15-20 мл додають 3 мл води, 0,7 мл 10%-ного розчину соляної кислоти і далі надходять, як зазначено при отриманні стандартної кривої.

Визначення вільної п-амінобензоілглутаміновой кислоти.

До 2 мл розчину А в колбі ємністю 15-20 мл додають 8 мл води і далі надходять, як описано при визначенні загальної кількості пара-амінобензоілглутаміновой кислоти. Вміст фолієвої кислоти в грамах (х) обчислюють за формулою

де а - загальна кількість вільної та звязаної пара-амінобензоілглутаміновой кислоти, знайденої по калібрувальній кривій, в міліграмах; b - кількість вільної пара-амінобензоілглутаміновой кислоти, знайденої по калібрувальної кривої, в міліграмах; 25 і 10 - постійні коефіцієнти; 3,22 - фактор перерахунку пара-амінобензоілглутаміновой кислоти на фолієву кислоту.