Определение среднесмертельной дозы токсина ЛД50, яда обыкновенных гадюк Viperа berus на сеголетках озерной лягушки Rana ridibunda
2.2 Характеристика яда
Образцы ядовитого секрета обыкновенной гадюки были получены в лаборатории герпетологии и токсинологии Института экологии Волжского бассейна РАН. Яды представляли собой высушенный (кристаллизованный) ядовитый секрет, полученный от нескольких (8-12 шт.) экземпляров обыкновенных гадюк из одной популяции. Яд высушивали две недели в эксикаторе над хлористым кальцием при комнатной температуре и хранили в стеклянной таре при температуре +50-+6 0 С в холодильнике. В экспериментах использованы образцы яда гадюк, встречающихся на территории Нижегородской, Самарской, Саратовской и Пензенской областей.
Растворы ядовитого секрета гадюк готовили на физиологическом растворе в концентрации 3,0-6,0 мг/мл непосредственно перед экспериментом. Инъекции раствора яда проводили внутрибрюшинно, в правую нижнюю область брюшной стороны лягушки. Для инъекций использовали микрошприц объемом 100 мкл .Расчет доз введенного яда рассчитывали на кг живого веса лягушек следующим образом таблице 4.
Для оценки ЛД50 каждого образца яда гадюк использовали несколько групп лягушек, которым вводили яд в возрастающих концентрациях. Конкретные условия проведения эксперимента указаны в примечаниях к таблицам, иллюстрирующим результаты работы. Наблюдения за животными вели в течение 24 часов (острый опыт), после этого подсчитывали количество умерших и выживших лягушек.
Таблица 3 - Расчет эффективных доз введения яда обыкновенной гадюки лягушкам
|
Концентрация исходного раствора яда, мг/мл |
Объем введенного раствора на 1 лягушку, мкл |
Кол-во введенного яда на 1 лягушку, мкг |
Доза яда (кол-во введенного яда на кг живого веса), мг/ кг |
|
|
5,0 |
5,0 |
25,0 |
7,4 |
|
|
5,0 |
10,0 |
50,0 |
14,7 |
|
|
5,0 |
15,0 |
75,0 |
22,1 |
|
|
5,0 |
20,0 |
100,0 |
29,4 |
|
|
5,0 |
30,0 |
150,0 |
44,2 |
Расчет ЛД50 проводили методом модифицированного пробит-анализа, который подробно описан в работе сотрудников кафедры экологии Нижегородского университета.
Пробит-анализ позволяет не только вычислить ЛД50 конкретного вещества, но и сравнить токсикологический эффект разных соединений. Для сравнения двух образцов ядов гадюк мы определяли доверительный интервал и делали вывод о статистической значимости различий на 5 %-ном уровне значимости, принятом в биологии.