Исследование высших грибов Pleurotus ostreatus и Coprinus lagopides в качестве возможных продуцентов гидрофобинов

дипломная работа

3.3.4.1.2 Экстракция гидрофобинов из плодовых тел

Так как содержание поверхностно-активных белков в биомассе гриба Pleurotus ostreatus оказалось довольно низким, проводилось исследование на наличие гидрофобинов в плодовых телах данной культуры.

Экстракцию проводили отдельно из шляпок и ножек плодовых тел Pleurotus ostreatus. Измельченные плодовые тела выдерживали в кипящем растворе трис-HCl буфера, содержащем 1% SDS, после чего гидрофобины были отделены от других растворимых белков путём центрифугирования при 4100 x g в течение 10 минут при 4оС и несколькими смываниями водой. Далее экстракцию проводили в соответствии с методикой, описанной для выделения поверхностно-активных белков из биомассы.

3.3.4.1.3 Выделение гидрофобинов из нативного раствора

Также, в соответствии с литературными данными, на наличие гидрофобинов была исследована культуральная жидкость гриба Pleurotus ostreatus. Выделение поверхностно-активных белков из нативного раствора проводилось следующим образом: после 7 дней выращивания гриба гидрофобины, выделившиеся в среду, были агрегированы путём вспенивания нативного раствора культуральной жидкости с использованием аэратора. Затем пена была собрана и отцентрифугированна при 4100 x g в течение 10 минут при 4оС. Получившийся осадок подвергали сушке в сушильном шкафу при температуре 50оС. Далее осадок был обработан трифторуксусной кислотой в течение 2-х часов. После кислоту выпаривали на вакуум-выпарной установке и из полученного сухого осадка белки экстрагировали 60% этиловым спиртом и центрифугировали при 4000 x g, 10 мин, 4оС. Супернатант был использован для дальнейших анализов, в том числе для разделения в ВЭЖХ.

Делись добром ;)