Убедительная просьба приносить на занятия по физиологии крови резиновые перчатки

Практические работы

Внимание! Экзаменационный навык

Работа 1. Подсчет эритроцитов крови в камере Горяева

Ход работы – см. «Основы оценки функций организма человека», С. 11-12.

Внимание! Экзаменационный навык.

Работа 2. Определение количества гемоглобина крови по методу Сали (колориметрический метод)

Ход работы – см. «Основы оценки функций организма человека», С. 13-14.

Внимание! Экзаменационный навык

Работа 3. Определение скорости оседания эритроцитов (СОЭ) по методу Панченкова

Ход работы – см. «Основы оценки функций организма человека», С. 12-13, 56-57.

Работа 4. Вычисление цветового показателя ( см. также «Основы оценки функций организма человека», С. 55-56).

Учебно-исследовательская цель:

1) научиться рассчитывать цветовой показатель;

2) выявить зависимость насыщения эритроцитов гемоглобином от количества эритроцитов и содержания гемоглобина.

Ход работы. Цветовой показатель (ЦП) рассчитывается по формуле:

В норме ЦП составляет 0,9-1,1.

Результаты: …

Вывод: …

Работа 5. Определение осмотической резистенстности эритроцитов (ОРЭ)

Наиболее простым и распространенным в клинике методом оценки физико-химических свойств эритроцитов является исследование их осмотической резистентности (устойчивости). Метод основан на количественном определении степени гемолиза эритроцитов в гипотонических растворах хлорида натрия, в которых, как известно, происходит их набухание и гемолиз. Осмотическая резистентность эритроцитов отражает стабильность их клеточных мембран и зависит от степени их зрелости, формы и изменения состава плазмы.

В изотоническом растворе (0,9% NаСl) эритроциты сохраняют свой объем, а в гипертоническом растворе теряют воду и сморщиваются – такое явление называется «плазмолиз». В гипотоническом растворе они поглощают воду, их объем увеличивается до определенного «критического» уровня, превышение которого сопровождается гемолизом и выходом гемоглобина в плазму крови.

Минимальную осмотическую резистентность эритроцитов (ОРЭ min) определяют по гипотоническому раствору хлористого натрия такой концентрации, которая предшествует началу гемолиза наименее устойчивых эритроцитов (в норме 0,46–0,48% раствора NаCl). Максимальная осмотическая резистентность эритроцитов (ОРЭ mах) соответствует раствору хлористого натрия, предшествующему полному гемолизу всех эритроцитов (в норме 0,32–0,34% раствора NaCl).

Выполнение методики

Предварительно готовят рабочие растворы натрия хлорида различной концентрации: 1%; 0,85%; 0,75%; 0,70%; 0,65%; 0,60%; 0,55%; 0,48%; 0,46%; 0,40%; 0,34%; 0,32%; 0,20% и 0,10%. Рабочие растворы натрия хлорида разливают в 14 центрифужных пробирок (по 5,0 мл).

В пробирку с гепарином берут 1,5 мл венозной крови, перемешивают и добавляют в каждую из 14 центрифужных пробирок с рабочими растворами натрия хлорида по 0,02 мл гепаринизированной крови. Пробирки оставляют на 1 ч при комнатной температуре, а затем центрифугируют (5 мин при 2000 об./мин). Надосадочную жидкость из каждой пробирки исследуют на фотоэлектроколориметре. В качестве «холостой» пробы используют надосадочную жидкость из пробирки, содержащей 1% раствор натрия хлорида. Определяют процент (степень) гемолиза, приняв за 100% гемолиз в пробирке с 0,1% раствором натрия хлорида.

Гемолиз можно определять и визуально по цвету надосадочной жидкости. При полном гемолизе эритроцитов заметна интенсивная красно-лаковая окраска надосадочной жидкости, тогда как начало гемолиза (минимальная его степень) определяется по легкому порозовению.

Интерпретация результатов

В норме начало гемолиза отмечают при концентрации 0,46–0,48%, а полный гемолиз – при 0,32–0,34% растворе натрия хлорида (рис. А). При некоторых гемолитических анемиях (врожденной микросфероцитарной, аутоиммунной гемолитической и др.) наблюдается понижение осмотической резистентности: гемолиз начинается при концентрации раствора натрия хлорида 0,55–0,70% и заканчивается при концентрации 0,40–0,45% (рис. Б).

Более осмотически стойкими являются эритроциты, поступившие в кровоток из костного мозга, в особенности менее зрелые клетки (ретикулоциты, полихроматофилы), которые имеют уплощенную дисковидную форму и малый индекс сферичности. Мене стойкими являются эритроциты, завершающие жизненный цикл.

Нарушение осмотической резистентности является частым следствием стрессов, неблагоприятной экологической ситуации, интоксикаций и расценивается как важное звено патогенеза, а иногда и этиологический фактор многих болезней (механическая желтуха, талласемия, гемоглобиноз, рак желудка, кровопотеря, гипотиреоз) (см. табл.).

Таблица