1. Метод генетического нокаута
Нокаут гена - это молекулярно-генетический метод, в ходе которого задуманные исследователем изменения вносятся в нуклеотидную последовательность изучаемого гена или его регуляторных элементов. Мышь является наиболее адекватным модельным животным для использования технологии инактивации генов. Это обусловлено следующими причинами:
а) мышь - хорошо изученный и доступный объект;
б) геном мыши и человека содержит приблизительно одинаковое число генов;
в) сходство аминокислотных последовательностей всех белков человека и мыши составляет около 90%.
Однако основной причиной использования мыши в качестве модели для инактивации гена является возможность изолирования эмбриональных стволовых клеток, в которых любой ген может быть модифицирован [29]. Клеточные линии, содержащие модифицированный ген, могут быть привнесены в развивающийся зародыш, что позволяет получить химерное животное, несущее искусственно созданную мутацию (рис. 1).
Рис. 1. Стратегия получения линии нокаутированных мышей [5].
Молекулярно-генетическим механизмом, позволяющим осуществлять инактивацию гена, является гомологичная рекомбинация между экзогенной ДНК, несущей задуманные исследователем изменения, и геномной ДНК объекта.
Классическая схема получения нокаутированных мышей включает несколько этапов: получение векторной конструкции, с последующим внесением ее в культуру эмбриональных стволовых клеток (ЭСК) и отбор трансформантов. Трансформированные ЭСК вносят в зародыш, и полученных химерных животных скрещивают для получения линии мышей, гомозиготных по полученной мутации (см. рис. 1).
- Тезисы
- Вступление
- 1. Метод генетического нокаута
- 1.1 Особенности векторных конструкций
- 1.2 Внесение вектора в эмбриональные стволовые клетки
- 2. Роль метилирования ДНК в контроле генома
- 3. "Программируемый нокаут генов"
- 4. Линии нок-аутных мышей
- 4.1 ФНО/ЛТ панель
- 4.2 BALB/cMBD2
- 4.3 B6SJL-Tg(SOD1-G93A)dl1Gur/J
- 4.4 C57BL/MUC2
- 4.5 C57BL/6Kaiso
- 5. Примеры использования нокаутированных мышей для изучения функций генов и наследственных заболеваний человека
- Выводы