2.1 Вітамін В1

1. Якісні реакції. При додаванні до підкислення розведеною азотною кислотою 1% -ному розчину декількох крапель розчину нітрату срібла випадає сирнистий осад, не розчинний в азотній кислоті.

2. Тіохромна проба основана на перекладі тіаміну червоною кровяною сіллю в лужному середовищі в тіохром, розчинний в бутиловому або ізоамілового спирті з синьою флуоресценцією:

До 5 мл розчину тіаміну (з вмістом 0,01 мг) в ділильній лійці додають 5 мл 1% -ного розчину червоної кровяної солі, перемішують і залишають стояти протягом 2 хвилин. Потім додають 20 мл ізобутилового спирту і сильно перемішують, струшуючи протягом 1 хвилини, відокремлюють спиртовий шар і фільтрують. Тіохром, отриманий в результаті окислення тіаміну, обумовлює синю флуоресценцію.

3. Тіамін дає осдкиз деякими загальними алкалоїдними реактивами, наприклад з реактивом Драгендорфа (пікринова кислота не дає осаду).

Кількісне визначення.

1. Після нейтралізації (по бромтимолового синьому) тіамін-бромід визначається аргентометрично.

2. Другий метод оснований на властивості вітаміну В₁ утворювати з диазотированного пара-аміно-ацетофенон зєднання фіолетово-червоного кольору, яке нерастворимо в воді, з багатьма органічними розчинниками утворює кольорові розчини, що допускають порівняння з еталонними розчинами. З органічних розчинників застосовують звичайно ксилол або толуол.

Для визначення тіаміну, розчиненого в однорідному безбарвному розчиннику, немає необхідності витягати кольорове зєднання з розчину. У цих випадках додають изопропанол в кількості, достатній для розчинення кольорового сполуки, і проводять визначення по стандартному розчину.

Для аналізу беруть таку кількість препарату, в якому міститься 100 мікрограмів (0,0001 г) тіаміну. Еталон готують розчиненням 50 мг вітаміну Вх (точне зважування) в 500 мл 50% за обємом) етанолу, який містить 1 краплю 4 н. соляної кислоти. Хоча цей еталонний розчин можна зберігати при кімнатній температурі протягом декількох місяців, воліють все ж готувати його на термін не більше 1 місяця. Крім еталонного розчину заготовляють: 1) 0,03% -ного розчину пара-аміно-ацетофенону в 0,2 н. соляній кислоті; 2) 0,1% -ний розчин нітриту натрію; 3) 1 н. і 2,5 н. розчини їдкого натру; 4) 50% -ний етанол (за обємом); 5) толуол; 6) изопропанол і 7) 4 н. соляну кислоту.

Для приготування реактиву під назвою діазораствор А в невеликої склянке змішують 10 мл розчину пара-аміно-ацетофенону і 2 мл розчину нітриту натрію і охолоджують не менше 2 хвилин в крижаній воді. Перед користуванням до суміші додають 3 мл 1 н. розчину їдкого натру і збовтують. Реактив під назвою діазораствор Б готують так само, як і розчин А, з тією лише різницею, що замість 1 н. розчину їдкого натру до розчину Б додають 2,5 н. розчину їдкого натру.

Випробуваний ампульний розчин змішують з такою кількістю перегнанной води, щоб кожен мілілітр суміші містив близько 100 мікрограмів тіаміну. В калібровану пробірку на 10 мл вливають 1 мл суміші, додають 2 мл 50% -ного етанолу і поміщають у водяну баню при температурі 60 °. Через 1 хвилину доливають 1 мл діазораствора А, сильно збовтують і знову залишають в лазні на 2--3 хвилини. Потім суміш охолоджують, додають 1 краплю 4 н. соляної кислоти і изопропанол до мітки, збовтують і порівнюють в колориметрі з контрольним розчином, виготовленим змішанням 1 мл води з 1 мл еталонного розчину тіаміну, 1 мл 50% етанолу та 1 мл діазорозчину А за методом, описаним вище.

3. Для визначення вітамін В₁ по іншому методу розчиняють 0,4-1,5 мг його в 10 мл води, додають 0,5 мл реактиву з фосфорно-Вольфрамат і 0,4-0,6 мл 10% -ного розчину їдкого натру. Зявляється синє забарвлення. Титрують 0,002 н. розчином червоної кровяної солі, 1,82 мл якого відповідає 1 мг вітаміну В₁ до зникнення синього забарвлення.

Реактив готують так: 10 г вольфрамату натрію розчиняють в 75 мл води, додають 8 мл 85% -ной фосфорної кислоти і слабо нагрівають протягом 2 годин. Якщо розчин зеленіє, додають трохи бромної води після нагрівання протягом зазначеного часу і надлишок брому видаляють кипятінням. За охолодженні доводять до 100 мл.